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微生物鑒定中常用的生化反應 - 實驗方法
酷爾化學 / 2021-08-30

 一、 淀粉水解試驗

1. 準備淀粉培養基平板:將熔化后冷卻至50℃左右的淀粉培養基倒入無菌平皿中,待凝固后制成平板。
2. 接種:用記號筆在平板底部劃成兩部分,在每部分分別寫上菌名,用接種環取少量的待測菌,點接在培養基表面的相對應部分的中心,其中一個菌種應是枯草桿菌做對照菌
3. 培養:將接種后的平皿置于28℃恒溫箱培養24h。
4. 檢測:取出平板,打開平皿蓋,滴加少量的碘液于平板上,輕輕旋轉,使碘液均勻鋪滿整個平板。菌落周圍如出現無色透明圈,則說明淀粉已經被水解,表示該細菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小說明測試菌株水解淀粉能力的強弱。
二、油脂水解試驗
1. 將裝有油脂培養基的三角瓶置于沸水浴中熔化,取出并充分振蕩,使油脂均勻分布,再傾入無菌平皿中,待凝固成平板。
2. 接種:于同一平皿的兩邊接種,其中一種是金黃色葡萄球菌作為對照菌。置于37℃恒溫箱培養24h,取出后觀察平板菌苔顏色,如果出現紅色斑點,即說明脂肪被水解了,此反應為正反應。紅色斑點大小說明測試菌株水解脂肪能力的強弱。
三、明膠液化試驗
1. 接種:用穿刺接種法接種大腸桿菌或產氣腸桿菌于明膠培養基中。
2. 培養:放20℃恒溫箱中培養48h。若細菌在20℃下不長,則應放在最適溫度下培養。
3. 觀察結果:觀察培養基有無液化情況及液化后的形狀。因明膠在低于20℃時凝固,高于25℃時自行液化,若是在高于20℃下培養的細菌,觀察時應放在冰浴中觀察,若明膠被細菌液化,即使在低溫下明膠也不會再凝固。
四、石蕊牛乳試驗
1. 接種:將黏乳產堿桿菌和銅綠假單胞菌接種入石蕊牛乳培養基中。
2. 培養:將接種后的試管于37℃恒溫培養7d,另外保留一支不接種的石蕊牛乳培養基作為對照。
3. 結果觀察:取出培養物,以不接種任何細菌的試管為對照,觀察接種不同細菌生長后的變化情況。                              
五、甲基紅試驗(M.R.試驗)
將大腸桿菌和產氣桿菌分別接種到葡萄糖蛋白胨水培養基中,32℃培養 24h,加甲基紅指示劑數滴,觀察結果,呈現紅色者為陽性,呈現黃色者為陰性。
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